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放线菌的培养与形态观察

admin

11月 7, 2023

放线菌是一组革兰氏阳性细菌,可以形成分支丝或菌丝体。 放线菌的菌丝由基生菌丝、气生菌丝和孢子丝组成; 大多数放线菌的菌丝生长在靠近培养基表面或深入培养基内部,称为基底菌丝(简称“基本丝”)。 当基丝生长到一定阶段时,还能在空气中长出气生菌丝(简称“气丝”),并进一步分化产生孢子丝和孢子。 有些放线菌只产生基丝,但不产生空气丝。

由于基底内菌丝体生长到培养基中,因此很难被接种工具拾取。 因此,为了观察放线菌的形态特征,研究人员设计了插入法来培养放线菌。

将灭菌后的盖玻片置于高氏1号培养基平板上,然后接种。 放线菌可以沿着培养基与盖玻片的交界处扩散生长并附着在盖玻片上。

因此,观察时,轻轻取下盖玻片(有细菌的一面朝下),放在干净的载玻片上,将镜头放在盖玻片插入的交界处,直接进行镜检。 该方法可以观察放线菌在自然生长状态下的特征,便于观察不同生长阶段的形态。

实验方法:

插入法培养放线菌

1. 准备:Goregard固体培养基并灭菌。

2、倒入平板:将融化并冷却的培养基加热到50℃左右,倒入平板中。 该板比普通实验板厚。 让它凝固并放置备用。

3、切片:无菌操作,用镊子(无菌手指)将灭菌后的盖玻片以约40-50度的角度切入琼脂中。 切片数量可根据需要确定。

4、接种:用接种环挑出菌株,在培养基与盖玻片交界处的琼脂平板上划线接种。

5. 培养:将切好的板倒置,30-37°C 培养。 培养时间取决于观察目的,通常为3-7天。

6. 观察:

(1)拉出盖玻片;

(2) 将细胞面朝下放在载玻片上;

(3)将镜头置于盖玻片与培养基交界处进行显微镜观察;

(4)绘制显微观察结果。

实验步骤:.

插入法培养放线菌

1. 制备 Goshi No.1 固体培养基并灭菌。

2、倒盘:熔化冷却至50℃左右,倒入盘中。 该板比普通实验板厚。 让它凝固并放置备用。

3.切片

用酒精擦拭工作台 → 取下盖玻片

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用无菌镊子(或无菌手指)将灭菌后的盖玻片以约40-50度的角度挖入琼脂中,并将其中两个并排插入。

4. 疫苗接种

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用接种环挑取细菌

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在培养基和盖玻片交界处的琼脂板上划一条条纹。

盖上培养皿,将其倒置,并在 30-37°C 下孵育

5、观察

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拉出盖玻片

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细菌面朝下进入载玻片

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将镜片置于盖玻片与培养基交界处,显微镜下观察

防范措施:

1、倒板要厚一些。

2、注意无菌操作。